De Opsporingsmelk 96Wells/Kit ISO9001 van melamine Snelle ELISA Milk Test Kit For

Melamine ELISA Test Kit voor Detectie Melk 96Wells/Kit ISO9001

 

1. Principe

Deze testkit is gebaseerd op de indirecte competitieve enzymimmunoassay voor de detectie van melamine in het monster.Het koppelingsantigeen is vooraf gecoat op de strepen van de microwells.De melamine in het monster en de koppelingsantigenen die vooraf zijn gecoat op de microwell-strepen strijden om anti-melamine-antilichamen.Na de toevoeging van het enzymconjugaat wordt het TMB-substraat toegevoegd voor kleuring.De waarde van de optische dichtheid (OD) van het testmonster heeft een negatieve correlatie met de melamineconcentratie in het monster.Deze waarde wordt vergeleken met de standaardcurve en vervolgens wordt de melamineconcentratie verkregen.

 

 

2.Melk testkitComponenten

1	Micro-well-strips	12 strips waarvan 8 verwijderbaar putten elk
2	6 × standaardoplossing (elk 1 ml)	0ppb	0,5ppb
		1,5ppb	4,5ppb
		13,5ppb	40,5ppb
3	Spiking standaard oplossing	1ppm	1 ml
4	Enzym geconjugeerd	7ml	rode pet
5	Antilichaam werkende oplossing	7ml	blauwe pet
6	Substraat A	7ml	witte pet
7	SubstraatB	7ml	zwarte dop
8	Oplossing stoppen	7ml	gele dop
9	10x monstername Een oplossing	50ml	transparante dop
10	20x monsterextractie B-oplossing	50ml	blauwe pet
11	20× geconcentreerde wasbuffer	15ml	witte pet

 

3. Technische specificaties

Gevoeligheid: 0,5 ppb

Incubatortemperatuur: 25℃

Incubatortijd: 30min~15min

Detectie limiet:

Boter, snoep, kaas 10ppb

Kruisreactiepercentage:

Melamine 100%

Herstelpercentage:

Boter 90±25%

Snoep, kaas 95±25%

 

4. Benodigde maar niet verstrekte materialen

1) Uitrusting: microplaatlezer, printer, vortex, centrifuge, meetpipetten, balans (een wederzijdse gevoeligheid van 0,01 g), waterbad van 70 ℃;

2) Micropipetten: eenkanaals 20~200 µL, 100~1000 µL;en 30~300 μl met meerdere kanalen;

 

5. Monstervoorbehandeling

Instructies (de volgende punten moeten vóór de voorbehandeling worden behandeld)

1) Alleen de wegwerptips kunnen worden gebruikt voor de experimenten en de tips moeten worden vervangen wanneer ze voor verschillende reagentia worden gebruikt;

2) Vóór het experiment moet elke experimentele uitrusting schoon zijn en indien nodig opnieuw worden gereinigd om verontreiniging te voorkomen die de experimentele resultaten verstoort.

Bereiding van de oplossing

1) Monstername Een oplossing

Verdun 10x monsterextractie Een oplossing met gedeïoniseerd water in een verhouding van 1:9;

2) Monster extraheren B-oplossing

Verdun 20x monster dat B-oplossing extraheert met gedeïoniseerd water om 1:19.

 

5.1 Boter

1) Neem 1 g verse boter in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 5 ml monsterextractie A-oplossing toe, incubeer gedurende 5 minuten in een waterbad van 70 ℃, vortex en schud gedurende 5 minuten, centrifugeer bij meer dan 4000 omw/min bij kamertemperatuur gedurende 5 minuten;

2) Neem 50 µl onderlaagvloeistof voor analyse

Vouw van verdunning van monster: 5

5.2 Snoep, kaas

1) Neem 1 g vers monster in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 5 ml monsterextractie B-oplossing toe, incubeer gedurende 5 minuten in een waterbad van 70 ℃, vortex en schud gedurende 5 minuten, centrifugeer bij meer dan 4000 r/min bij kamertemperatuur gedurende 5 minuten;

2) Neem 50 µl onderlaagvloeistof voor analyse

Vouw van verdunning van monster: 5

 

6. ELISA-procedures

6.1 Instructies

1 Breng alle reagentia en microwell-strips op kamertemperatuur (20-25 ℃).

2 Breng alle reagentia onmiddellijk na gebruik terug naar 2-8 ℃.

3 De reproduceerbaarheid van de ELISA-analyse hangt grotendeels af van de consistentie van het wassen van de platen.De juiste werking van plaatwassen is het belangrijkste punt in de procedures van ELISA.

4 Voor de incubatie bij constante temperaturen moeten alle monsters en reagentia worden blootgesteld aan licht en moet elke microtiterplaat worden afgesloten door het afdekmembraan.

6.2 Bedieningsprocedures

1)Breng de testkit gedurende minimaal 30 minuten op kamertemperatuur (20-25 ℃), merk op dat elk reagens voor gebruik gelijkmatig moet worden geschud;plaats de vereiste micro-well-strips in plaatframes.De ongebruikte microplaat opnieuw verzegeld, bewaard bij 2-8 ℃, niet bevroren.

2)Bereiding van de oplossing: verdun 15 ml van de 20X geconcentreerde wasbuffer met het gedeïoniseerde water tot 300 ml voor gebruik;

3)Nummering: nummer de micro-wells volgens monsters en standaardoplossing;elk monster en elke standaardoplossing moet in tweevoud worden uitgevoerd;noteren hun posities.

4)Voeg 50 µL van het monster/de standaardoplossing toe aan afzonderlijke duplicaatputjes, voeg vervolgens 50 µL enzymconjugaat toe, voeg vervolgens 50 µL antilichaam-werkoplossing toe aan elk putje, schud goed, sluit de microplaat af met het afdekmembraan en incubeer gedurende 30 minuten bij 25°C;

5)Giet de vloeistof uit de putjes, was de microplaat 5-6 keer met de verdunde wasbuffer met 250 µL/putje.Elke keer de well met de verdunde wasbuffer 15-30 seconden laten weken en vervolgens laten drogen op absorberend papier (als er luchtbellen zijn na het flapperen, knip ze dan af met de schone tips).

6)Kleuring: voeg 50 µL van substraat A toe, daarna 50 µL van substraat B in elk putje.Meng voorzichtig door de plaat handmatig te schudden en incubeer bij 25 ℃ gedurende 15 minuten in het donker voor kleuring;

7)Bepaling: voeg 50 µL van de stopoplossing toe aan elk putje.Meng voorzichtig door de plaat handmatig te schudden.Stel de golflengte van de microplaatlezer in op 450 nm om de OD-waarde van elk putje te bepalen.(Raad aan om de OD-waarde bij de dubbele golflengte 450/630nm binnen 5 minuten te lezen).

 

7. Resultaatbeoordeling

Er zijn twee methoden om de resultaten te beoordelen;de eerste is het ruwe oordeel, terwijl de tweede de kwantitatieve bepaling is.Merk op dat de OD-waarde van het monster een negatieve correlatie heeft met het gehalte aan melamine.

7.1 Kwalitatieve bepaling

Het concentratiebereik (ng/ml) kan worden verkregen door de gemiddelde OD-waarde van het testmonster te vergelijken met die van de standaardoplossing.Ervan uitgaande dat de OD-waarde van het monster Ⅰ 0,3 is en die van het monster Ⅱ 1,0 is, is de OD-waarde van standaardoplossingen: 2,043 voor 0 ppb, 1,604 voor 0,5 ppb, 1,101 voor 1,5 ppb, 0,512 voor 4,5 ppb, 0,161 voor 13,5 ppb , 0,055 voor 40,5 ppb, dienovereenkomstig is het concentratiebereik van het monsterⅠ 4,5 tot 13,5 ppb, en dat van het monster Ⅱ is 1,5 tot 4,5 ppb.

7.2 Kwantitatieve bepaling

De gemiddelde waarde van de absorptiewaarden is gelijk aan het percentage van de gemiddelde OD-waarde (B) van het testmonster en de standaardoplossing gedeeld door de OD-waarde (B0) van de eerste standaardoplossing (0 standaard) en vervolgens vermenigvuldigd met 100 %, dat is

 

Percentage van absorptiewaarde =	B	×100%
	B0

 

B—de gemiddelde (dubbele wells) OD-waarde van het testmonster of de standaardoplossing

B0—de gemiddelde OD-waarde van de 0ng/mL standaardoplossing

Teken de standaardcurve met de absorptiepercentages van de standaardoplossingen en de semilogaritmische waarden van de Melamine standaardoplossingen (ng/mL) als respectievelijk Y- en X-as.Lees de overeenkomstige concentratie van het testmonster af van de standaardcurve door het absorptiepercentage ervan op te nemen in de standaardcurve.De resulterende waarde wordt vervolgens vermenigvuldigd met de overeenkomstige verdunningsfactor, waardoor uiteindelijk de melamineconcentratie in het monster wordt verkregen.

 

8. Voorzorgsmaatregelen

1)De kamertemperatuur onder 25℃ of de temperatuur van de reagentia en de testmonsters die niet op kamertemperatuur (20-25℃) komen, zal leiden tot een lagere standaard OD-waarde.

2)Droogte van de microtiterplaat tijdens het wasproces zal gepaard gaan met situaties zoals de niet-lineaire standaardkrommen en de ongewenste reproduceerbaarheid;Ga dus direct na het wassen door naar de volgende stap.

3)Gelijkmatig mengen, anders ontstaat de ongewenste reproduceerbaarheid.

4)De stopoplossing is de 2 M zwavelzuuroplossing, vermijd contact met de huid.

5)Gebruik de kit niet langer dan de vervaldatum.Het gebruik van verdunde of vervalste reagentia uit de kits zal leiden tot veranderingen in de gevoeligheid en de detectie van OD-waarden.Wissel de reagentia uit de kits met verschillende lotnummers niet uit om te gebruiken.

6)Plaats de ongebruikte microtiterplaat in een zelfsluitende zak om deze opnieuw te sluiten.De standaardstof en de kleurloze kleurvormer zijn lichtgevoelig en kunnen dus niet direct aan licht worden blootgesteld.

7)Gooi de kleuroplossing weg met elke kleur die de degeneratie van deze oplossing aangeeft.De detectiewaarde van standaardoplossing 1 (0 ppb) van minder dan 0,5 duidt op degeneratie ervan.

8)De optimale reactietemperatuur is 25 ℃, en te hoge of lage temperaturen zullen leiden tot veranderingen in de detectiegevoeligheid en OD-waarden.

 

9. Opslag en vervaldatum

Opslag: opgeslagen bij 2-8 ℃, niet bevroren.

Vervaldatum: 12 maanden;productiedatum staat op de doos

Opmerking: als het vacuümpakket van de microplaat lekt, is het nog steeds geldig om te gebruiken, heeft het geen invloed op het testresultaat, wees ontspannen om te gebruiken.

 

 

Vraag 1: Hoe lang duurt het voordat u verzendt?
A1: Wordt doorgaans binnen 7 werkdagen verzonden.

 

Q2: Ondersteunt u OEM/ODM?
A2: kan worden ondersteund.We kunnen aanpassen aan uw specifieke behoeften en specifieke hoeveelheden.

 

Q3: Hoe doet uw fabriek het op het gebied van kwaliteitscontrole?
A3: We hebben ISO9001-certificering en ISO13485-certificering, tot nu toe het hele productieproces, we hebben standaardregels, we voldoen aan het relevante gedrag en de wetten van de overheid.

 

V4: Is de after-sales service gegarandeerd?
A4: Wij bieden professionele online technische after-sales service.Als het product tijdens het experiment faalt, kunnen we dit leveren
één-op-één begeleiding via telefoon, video en andere vormen.

 

Q5: Wat is uw minimale bestelhoeveelheid?
A5: 1Kit.

 

Q6: Wat is de verzendmethode?
A6: Het kan per expresse (FEDEX, UPS, DHL, EMS, etc.) of door de lucht en over de grond worden verzonden. Bevestig dit bij ons voordat u een bestelling plaatst.